布魯氏桿菌ELISA酶聯(lián)抗體檢測試劑盒使用說明書（競爭法）

檢測原理

    本試劑盒由預(yù)包被布魯氏桿菌重組抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用競爭法原理檢測血清或血漿樣本中布魯氏桿菌抗體。實(shí)驗(yàn)時在酶標(biāo)板中加入先對照血清和待檢樣本，同時加入酶標(biāo)單抗工作液充分混勻，經(jīng)溫育后若樣品中含有布魯氏桿菌抗體，則與單抗工作液中的單克隆抗體競爭包被板上抗原的結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，溫育后經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負(fù)相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有布魯氏桿菌抗體。

試劑盒組成

儲存及有效期

2～8℃保存，有效期12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。

適用儀器

含450nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

樣品準(zhǔn)備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。

檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.根據(jù)待檢樣本數(shù)量取所需板條，每孔中加入樣本稀釋液25ul，再加入待檢血清25ul。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照50μl。

4.每孔再加入單抗工作液50ul，震蕩酶標(biāo)板充分混勻。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃溫箱孵育60分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿工作洗滌液，用震蕩的方式洗滌酶標(biāo)板60秒后棄去工作洗滌液，重復(fù)洗滌5次，*后一次拍干板孔中液體。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl。

7.置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

8.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿工作洗滌液，用震蕩的方式洗滌酶標(biāo)板60秒后棄去工作洗滌液，重復(fù)洗滌5次，*后一次拍干板孔中液體。

9.根據(jù)樣本數(shù)量將顯色液A與顯色液B按等體積比例混勻配置為底物工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。每孔加100ul，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

10.每孔加終止液100μl，混勻，于450nm測定各孔吸光值（OD值）。

參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陰性對照OD＞0.5，同時陽性對照OD＜0.5×陰性對照OD

檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)得到的陰性對照OD值，計(jì)算出陽性臨界OD值和陰性臨界OD值。

2. 陽性臨界OD=0.5×陰性對照OD；陰性臨界OD=0.6×陰性對照OD。

3. 樣本OD＜陽性臨界OD時，結(jié)果判讀為陽性。

4. 陽性臨界OD≤樣本OD≤陰性臨界OD時，樣本可能存在抗體效價不足或疑似感染。

5. 樣本OD＞陰性臨界OD時，結(jié)果判讀為陰性。

試驗(yàn)方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為定性檢測血清或血漿中布魯氏桿菌抗體的粗略評估。

2. 本試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。

5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用。