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首頁 >> 新聞中心 >>新聞中心 >> 非瘟檢測(cè),一個(gè)樣本的費(fèi)用多少?豬病檢測(cè)知識(shí)知多少?目前豬場(chǎng)或檢測(cè)機(jī)構(gòu)主要開展的檢測(cè)項(xiàng)目及方法介紹
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非瘟檢測(cè),一個(gè)樣本的費(fèi)用多少?豬病檢測(cè)知識(shí)知多少?目前豬場(chǎng)或檢測(cè)機(jī)構(gòu)主要開展的檢測(cè)項(xiàng)目及方法介紹

先來看一下檢測(cè)項(xiàng)目和方法


檢測(cè)項(xiàng)目里,一方面就是抗體監(jiān)測(cè)。目前主要用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),就是ELISA。通過抗體檢測(cè),一方面可以評(píng)估豬場(chǎng)的抗體水平,同時(shí)還可以判斷豬場(chǎng)是否有野毒感染。


表1展示了曾經(jīng)為一家豬場(chǎng)做的藍(lán)耳病抗體檢測(cè)。針對(duì)藍(lán)耳病,有些豬場(chǎng)在用疫苗,有些豬場(chǎng)沒有用疫苗,所以檢測(cè)到抗體之后,要進(jìn)行綜合分析:如果有抗體檢出,要了解豬場(chǎng)的免疫情況,如果沒有免疫過疫苗,有抗體檢出,應(yīng)該說豬場(chǎng)有感染,把它稱為感染抗體,判斷是否感染有經(jīng)驗(yàn)值,S/P≥2.5就證實(shí)豬場(chǎng)有感染;如果說豬場(chǎng)免疫過疫苗,有抗體檢出,應(yīng)該就是免疫產(chǎn)生的抗體。


表1 某豬場(chǎng)藍(lán)耳抗體檢測(cè)結(jié)果

編號(hào)

OD值

S/P值

結(jié)果

北小3

0.588

1.435

陽性

64

0.523

1.267

陽性

北大欄1

0.83

2.062

陽性

O73

0.07

0.093

陰性

欄3

0.14

0.275

陰性

OO5

0.075

0.106

陰性

南4

0.146

0.290

陰性

O63

0.113

0.205

陰性

南西1

1.035

2.593

陽性

定4

0.748

1.850

陽性

總檢測(cè)份數(shù)

10

臨界值

0.4。S/P≥0.40+

陽性率

50.0%

樣本變異系數(shù)

0.92


表2是為豬場(chǎng)所做的偽狂犬抗體檢測(cè)。對(duì)于偽狂犬抗體檢測(cè),目前我國(guó)有這么兩類檢測(cè)試劑盒,一是檢測(cè)gB抗體,指的是免疫所產(chǎn)生的抗體,另外是gE抗體,主要指的是感染產(chǎn)生的抗體。目前我國(guó)用偽狂犬的基因缺失疫苗來進(jìn)行免疫,與此同時(shí)可以檢測(cè)gE抗體,如果說有g(shù)E抗體檢出,就證實(shí)豬場(chǎng)中有偽狂犬野毒感染。


表2-1 偽狂犬gB抗體監(jiān)測(cè)(免疫抗體)

編號(hào)

OD值

S/N值

結(jié)果

北小3

0.059

0.045

陽性

64

0.096

0.073

陽性

北大欄1

0.079

0.060

陽性

O73

0.057

0.043

陽性

欄3

0.054

0.041

陽性

OO5

0.051

0.039

陽性

南4

0.05

0.038

陽性

O63

0.058

0.044

陽性

南西1

0.06

0.045

陽性

定4

0.068

0.051

陽性

總檢測(cè)份數(shù)

10

臨界值

0.6~0.7。陰性:S/N>0.70,陽性:S/N≤0.60,可疑:0.6<S/N≤0.70

陽性份數(shù)

10

陽性率

100.0%

樣本變異系數(shù)

0.23


表2-2 偽狂犬gB抗體檢測(cè)gE抗體監(jiān)測(cè)(感染抗體)

編號(hào)

OD值

S/N值

結(jié)果

北小3

1.486

1.046

陰性

64

0.841

0.592

陽性

北大欄1

1.362

0.958

陰性

O73

0.076

0.053

陽性

欄3

1.415

0.996

陰性

OO5

0.06

0.042

陽性

南4

0.079

0.056

陽性

O63

0.146

0.103

陽性

南西1

1.537

1.082

陰性

定4

0.05

0.035

陽性

總檢測(cè)份數(shù)

10

臨界值

0.6~0.7。陰性:S/N>0.70,陽性:S/N≤0.60,可疑:0.6<S/N≤0.70

陽性份數(shù)

6

陽性率

60.0%

樣本變異系數(shù)

0.97


第2個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目是抗原檢測(cè),可以用于疾病的診斷,包括流行病學(xué)調(diào)查,同時(shí)可以通過定量PCR檢測(cè)方法對(duì)疫苗中抗原含量進(jìn)行評(píng)價(jià),比如有些豬場(chǎng)使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法來進(jìn)行抗原含量檢測(cè)。目前PCR的檢測(cè)方法分為普通PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR,如很多實(shí)驗(yàn)室自建的等溫檢測(cè)方法,包括LAMP以及重組酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(RPA),這兩類方法敏感性比較高,但也會(huì)出現(xiàn)假陽性的情況。所以在臨床中,普遍采用的是PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行抗原檢測(cè)。


第3個(gè),目前在檢測(cè)過程中也可以做耐藥性分析。耐藥性分析主要通過藥敏實(shí)驗(yàn),為*病的防控來篩選敏感藥物。可以用發(fā)病豬的組織涂抹相應(yīng)的培養(yǎng)基,然后貼上藥敏片,最后根據(jù)藥敏片抑菌圈的大小來判定什么樣的藥比較敏感,也可以分離*來做藥敏實(shí)驗(yàn)。


第4個(gè)就是基因測(cè)序,目前在豬中用的最多的就是對(duì)藍(lán)耳病病毒的測(cè)序。通過測(cè)序,可以分析藍(lán)耳病病原的變異情況,從而在臨床中篩選匹配的疫苗。大家知道,藍(lán)耳病是在豬中危害比較大的傳染病,從1996年傳入我國(guó)之后,藍(lán)耳病的毒株具有多樣性。目前,在臨床中主要有三個(gè)毒株,一是經(jīng)典毒株,二是高致病毒株,還有類NADC30毒株。


在藍(lán)耳疫苗的使用過程中,有兩類疫苗,經(jīng)典毒株疫苗和高致病性毒株疫苗,到底該選擇哪個(gè)?我的觀點(diǎn)是這樣的:可以根據(jù)豬場(chǎng)中藍(lán)耳病的流行情況,選擇相應(yīng)的毒株,比如說豬場(chǎng)中主要發(fā)生和流行的是經(jīng)典毒株,就可以用經(jīng)典毒株的疫苗去免疫防控,如果流行的是高致病毒株,就可以選擇高致病毒株的疫苗進(jìn)行防控。因此有必要對(duì)它的基因進(jìn)行分析,目前主要是分析NSP2以及GP5基因。


以上是目前豬場(chǎng)或者檢測(cè)機(jī)構(gòu)主要開展的檢測(cè)項(xiàng)目,以及使用的方法。


針對(duì)這些項(xiàng)目,檢測(cè)機(jī)構(gòu)就有相應(yīng)的平臺(tái),包括洗滌消毒室、病原學(xué)檢測(cè)室、血清學(xué)檢測(cè)室,另外還有分子生物學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室,有些單位還有病理學(xué)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。依靠這樣的平臺(tái),就可以從事血清學(xué)、*學(xué)、病毒學(xué)、分子生物學(xué)的檢測(cè),并能評(píng)估耐藥風(fēng)險(xiǎn),因此可以為豬場(chǎng)提供相應(yīng)的服務(wù)。目前大多數(shù)檢測(cè)機(jī)構(gòu),對(duì)常發(fā)的病,比如藍(lán)耳病、圓環(huán)病毒、豬瘟、偽狂犬、細(xì)小、乙型腦炎等都可以進(jìn)行檢測(cè)。



- 以下是部分問答 -


問題1:現(xiàn)在非洲豬瘟全國(guó)泛濫,對(duì)于基層檢測(cè)有什么更好的方式或者是什么樣的建議?

答:現(xiàn)在基層生產(chǎn)中由于缺乏相應(yīng)的檢測(cè)平臺(tái),所以這方面會(huì)有一定的困難,建議如果在生產(chǎn)中沒有檢測(cè)設(shè)備可以用檢測(cè)試劑條進(jìn)行初步的篩查,確診就需要將收集的樣本送到專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室來進(jìn)行檢測(cè)。


問題2:非瘟檢測(cè),一個(gè)樣本的費(fèi)用多少?

答:對(duì)于病原檢測(cè)目前用到的試劑盒有兩大類:一是核酸類的檢測(cè)試劑盒,另一個(gè)是檢測(cè)卡。核酸的檢測(cè)試劑盒包括PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR兩類,檢測(cè)費(fèi)用在200元左右。抗體檢測(cè)主要用的是酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn),樣本的費(fèi)用大概是30~50元。


問題3:導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差的主要因素有哪些?

答:豬場(chǎng)在送檢的時(shí)候可能會(huì)把同樣的樣本送給2~3家或者更多的單位進(jìn)行檢測(cè)。關(guān)于檢測(cè)誤差有以下幾個(gè)方面的因素:*是與送檢的樣本有很大的關(guān)系,同一頭豬采取樣本的部分不同可能檢出的結(jié)果就不同;第二是盡量送檢到正規(guī)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)來進(jìn)行檢測(cè),如果自行檢測(cè),*購買正規(guī)的檢測(cè)試劑盒,來避免檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)誤差。


問題4:檢測(cè)偽狂犬中和抗體有什么意義?

答:中和抗體是豬得到保護(hù)很重要的抗體,但在臨床檢測(cè)中對(duì)中和抗體檢測(cè)的還不是很多。


問題5:膠體金檢測(cè)手段可信嗎?

答:膠體金指的就是檢測(cè)卡,它的特點(diǎn)是快速,基本上5分鐘就可以出結(jié)果,主要是基層或是現(xiàn)場(chǎng)的快速診斷。但是跟目前抗原檢測(cè)類的比較起來,它的敏感性較差,不夠準(zhǔn)確。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部在第1批所發(fā)布的非洲豬瘟中國(guó)檢測(cè)試劑盒中曾經(jīng)也做過比對(duì)實(shí)驗(yàn),檢測(cè)卡的敏感性在66%~67%。


問題6:直接用組織做藥敏試驗(yàn)科學(xué)么,會(huì)不會(huì)培養(yǎng)基中正常菌群占絕大部分?

答:組織做藥敏試驗(yàn)是目前藥敏實(shí)驗(yàn)中很重要的方法,這種方法比較快,今天做明天就可以出結(jié)果。如果需要精準(zhǔn)*是用純培養(yǎng)物來做,但在臨床中涉及到要及時(shí)的防控,需要迅速出結(jié)果,建議選取有代表性的樣品組織。藥敏實(shí)驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基選擇也是很重要的,需要給*培養(yǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)因子如血清等。


問題7:檢測(cè)結(jié)果的分析與臨床脫鉤如何指導(dǎo)生產(chǎn)?

答:這個(gè)問題也是廣大養(yǎng)殖戶普遍關(guān)心的問題,就是送檢結(jié)果可能跟他預(yù)想的可能不太一樣。所以送檢的樣本一定要有代表性,送檢的樣本是有發(fā)病典型癥狀的豬2~3頭,這樣檢測(cè)的結(jié)果準(zhǔn)確度會(huì)高一些。


問題8:如果懷疑豬感染藍(lán)耳病,一般采集哪些病料比較適合檢測(cè)?

答:豬的淋巴結(jié)、脾臟、肺臟、腎臟都可以送檢進(jìn)行檢測(cè)。另外目前有些新的技術(shù)也可以使比如唾液用于藍(lán)耳病的檢測(cè)。


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